Het tweesporig vliesje is, net als alle andere vliesjes, een dun, wit laagje op een substraat. Het tweesporig vliesje is microsopisch gemakkelijk te onderscheiden, omdat de basidiën tweesporig zijn.

Volgens de literatuur is het tweesporig vliesje niet kieskeurig, het kan op loof- en naalhout voorkomen, op takken of op bladeren. Het tweesporig vliesje kan dan ook in allerlei biotopen voorkomen.